丁基琼脂糖微球（Butyl Bio-Sep 4B）
产品说明书
丁基琼脂糖微球是将丁基键合在4B琼脂糖微球上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。
1.外观
本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
2.理化指标
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项 目 |
指 标 |
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配 基 |
丁 基 |
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基 质 |
4%琼脂糖微球 |
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颗粒形状及大小 |
球形 45~160 μm |
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配基密度 |
6~14μmol/ml介质** |
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Cl-容量 |
1.6~4.0μmol/ml介质** |
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蛋白质吸附量 |
>30mgHSA/ ml胶 |
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最高流速 |
30 cm/h* |
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耐压 |
0.01 MPa |
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化学稳定性 |
pH3~12.5中稳定;0.1%triton水溶液和1%MOPS溶液中稳定；5%甲醛中基本稳定 |
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耐热 |
45℃以下微球无变化，注意不能冷冻，不能高压灭菌 |
*检测条件： 层析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl
3.微生物指标
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项 目 |
单 位 |
指标要求 |
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菌落群数 |
cfu/ml |
< 100 |
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大肠菌数 |
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< 100 |
4．包装
产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。所选用的包装应有利于保证产品质量、方便运输和贮存。
5. 运输
运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
6. 贮存
产品应密封贮存在4℃~30℃（保存溶液为20% 乙醇+0.1M醋酸钠），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。
用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。
7.保质期：暂定5年。
8.应用
丁基琼脂糖微球是一种疏水层析介质，利用样品中组分疏水性的不同进行分离。用于乙肝疫苗和其他生物大分子的纯化分离。
下面简要介绍介质的使用过程。
8.1 装柱
⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。
⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
9.2平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
9.3上样
⑴样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
⑵一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
⑶介质对样品组分吸附的程度取决于介质配基的疏水性、样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高、样品组分疏水性和介质配基的疏水性强，介质对组分吸附牢。
9.4洗脱
可用以下几种方式之一进行洗脱，也可结合使用。
⑴降低盐析离子的浓度或提高盐溶离子的浓度。
⑵逐渐增加表面活性剂的量。
⑶可通过给洗脱液中加入乙二醇等有机溶剂以降低极性。
⑷通过降低温度。
常用的洗脱液是低盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
9.5再生 一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。必要时加表面活性剂和可溶性有机溶剂洗去杂质，再用水、梯度增加乙醇浓度洗、水洗，最后用结合蛋白的平衡液洗到平衡。 |
